基于AMPK/mTORC1自噬通路研究二氢杨梅树皮素对损伤A549细胞的保护作用

来源：湖北农业科学杂志2023年第9期北京时间：

作者：朱海滨, 曾春晖, 唐木兰, 池鑫宇, 邓浩健, 李雨君, 方静, 徐浩亮, 杨柯

单位：广西中医药大学药学院/广西高校中药药理重点实验室,南宁 530200

摘要：为研究二氢杨梅树皮素（APS）对脂多糖（LPS）诱导A549细胞损伤模型的保护作用及其对AMPK/mTORC1自噬通路的影响,随机分为正常组、模型组、APS高中低浓度组（80、40、20 μg/mL）。除正常组外,其余各组用30 μg/mL LPS诱导8 h构建A549细胞损伤模型,APS干预24 h后,MTT法检测A549细胞存活率、荧光法检测上清液LDH漏出量、Elisa法检测上清液TNF-α含量、MDC法细胞检测自噬体形成情况、自噬双标mRFP-GFP-LC3检测细胞自噬流情况,Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。AMPK抑制剂（CC）干预验证试验,随机分为正常组、模型组、LPS+APS组、LPS+CC组、LPS+APS+CC组,APS与CC共培养时间24 h后,采用Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。结果表明,APS使LPS损伤的A549细胞存活率明显升高,LDH漏出量、TNF-α含量明显减少,细胞内自噬体明显增加,自噬溶酶体明显增加,P62蛋白、p-mTOR/mTOR表达明显下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达明显上调;用CC抑制AMPK/mTORC1自噬通路后,APS能够明显上调P62蛋白、p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达,显著下调p-mTOR/mTOR蛋白表达。APS通过激活AMPK/mTORC1自噬通路促进自噬,增强自噬流,发挥对LPS诱导A549细胞损伤的保护作用。

关键词：二氢杨梅树皮素（APS）,脂多糖（LPS）,A549细胞,自噬,AMPK/mTORC1信号通路

基金资助：广西中医药大学研究生教育创新计划项目（YCSZ2019009; YCSZ2020009; YCXJ2021014）; 广西壮族自治区教育厅广西研究生教育创新计划资助项目（JGY2014086）