水禽细小病毒SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立与应用

来源：湖北农业科学杂志2024年第6期北京时间：

作者：汪宏才1,2, 商雨1,2, 马瑶1a, 曾哲1,2, 张蓉蓉1,2, 姚伦1,2, 罗玲1,2, 李丽1a, 温国元1,2, 罗青平1,2

单位：1.湖北省农业科学院,a.畜牧兽医研究所;b.农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室;c.畜禽病原微生物学湖北重点实验室,武汉 430064;2.湖北洪山实验室,武汉 430070

摘要：为了建立水禽细小病毒（WPV）快速检测方法,根据序列比对结果在水禽细小病毒NS基因SF3保守区域内设计特异性引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率（E）为90.0%,相关系数（R2）=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.77;除WPV出现S形扩增曲线外,新城疫病毒（NDV）、H9亚型禽流感病毒（H9 AIV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）、鸭肝炎病毒（DHAV）、鸭肠炎病毒（DEV）、鸭呼肠孤病毒（DRV）样品均未出现S形阳性扩增曲线;批内变异系数（CV）为0.15%~0.23%,批间变异系数为0.09%~0.28%。结果表明,SYBR Green I荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏度高和特异性强。临床样品检测结果表明,SYBR Green I荧光定量PCR与普通PCR的符合率达98.4%,灵敏度是普通PCR的1 000倍。SYBR Green I荧光定量PCR检测方法不仅能定性检测WPV,还可以进行定量检测,可用于种鸭场、种鹅场的WPV净化检测,也可用于WPV临床大量样品的快速检测。

关键词：水禽细小病毒,检测方法,SYBRGreenI,荧光定量PCR

基金资助：湖北省产业链项目（2022HSZD005）; 湖北省农业科技创新中心项目（2021-620-000-001-17）