基于SG-PI双重染色法的单增李斯特菌对苯扎溴铵耐受性快速检测方法的建立

来源：湖北农业科学杂志2025年第10期北京时间：

作者：汪国俊, 曹文杰, 季强, 栗绍文, 刘梅

单位：华中农业大学动物医学院,武汉 430070

摘要：为及时掌握单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)对苯扎溴铵的耐受情况,基于SYBR Green I(SG)与碘化丙啶(PI)双重染色,建立了一种能够快速检测Lm对苯扎溴铵耐受性的新方法——SG-PI双重染色法。结果表明,利用稀释法测定104株Lm分离株苯扎溴铵耐受性,检测出11株耐受菌株、93株敏感菌株。首先,确定出SG-PI双染最佳浓度组合为20×SG+5 μmol/L PI,双染最佳时间为5 min;然后,利用双染最佳条件对不同活菌百分比(P)的Lm混合液进行染色和荧光强度测定,计算两染料荧光强度比值(F),确定F与P的关系式为F=0.004 996P+0.303 6(R2=0.997 6),得出相对细胞活性(RCA)定量检测模型公式为RCA=[(F-0.303 6)/0.004 996]×100%;最后,通过暴露试验,确定出苯扎溴铵最佳暴露浓度为16 mg/L。与稀释法相比,SG-PI双重染色法对苯扎溴铵耐受菌株的测定是准确的(灵敏性为100%),对耐受菌株的测定比稀释法严格,具有可靠性,可作为验证新方法的评估标准。

关键词：单增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）,苯扎溴铵（BAC）,耐受性评估,SYBRGreenI（SG）,碘化丙啶（PI）

基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800100)