玉米籽粒蛋白质双向电泳技术体系的优化

来源：华北农学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：石海波, 王云生, 冯勇, 高聚林, 白海, 苏二虎, 张来厚, 赵瑞霞, 刘志雄, 黄灵忠, 姜丽丽

单位：1. 内蒙古农业大学 农学院, 内蒙古 呼和浩特 010019;；2. 内蒙古农牧业科学院 玉米研究所, 内蒙古 呼和浩特 010031;；3. 内蒙古农牧业科学院, 内蒙古 呼和浩特 010031;；4. 内蒙古医科大学 分子病理学实验室, 内蒙古 呼和浩特 010059

摘要：为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同pH值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用pH值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800 μg效果最佳,采用pH值4~7的IPG预制凝胶条时,总聚焦80 000 Vhs、上样量900 μg效果最佳,并且采用pH值4~7的IPG预制凝胶条相比pH值3~10的凝胶条能分离到更多的点,最后结合蛋白质点MALDI-TOF-TOF质谱鉴定分析,建立了一套适用于玉米籽粒的蛋白质双向电泳技术方法,即采用可溶性蛋白提取法提取蛋白,采用24 cm、pH值4~7的IPG干胶条,上样900 μg电泳效果最佳,等点聚焦程序:500 V、1 h,1 000V、1 h,2 000 V、1 h,4 000 V、2 h,8000 V、4 h,8 000 V、80 000 Vhs,500 V保持。试验研究为后续玉米籽粒发育差异蛋白研究奠定了技术基础。

关键词：玉米,籽粒,蛋白组学,双向电泳,

基金资助：内蒙古农牧业科学院青年创新基金项目(2011QNJJN09);国家粮食丰产科技工程项目(2011BAD16B13;2012BAD04B04;2013BAD07B04)