猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立

来源：华北农学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：顾昀, 周晓丽, 袁秀芳, 杜晓莉, 徐丽华, 李军星, 方维焕, 王一成

单位：1. 浙江大学, 浙江 杭州 310027;；2. 浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所, 浙江 杭州 310021

摘要：为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5 μg/mL,包被时间4 ℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37 ℃ 2 h及 4 ℃过夜。血清稀释度为1:100;37 ℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG稀释度为1:10 000,37 ℃温育60 min,底物显色37 ℃ 15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30 判为阳性,OD450nm≤0.27 判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。

关键词：猪流行性腹泻病毒,重组N蛋白,ELISA,

基金资助：浙江省三农六方项目(2012R22A60C01);浙江省重大科技专项重点农业项目(2012C12009-1)