溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核载体构建、表达条件优化及多克隆抗体制备

来源：华北农学报杂志2015年第1期北京时间：

作者：刘祥

单位：陕西理工学院 生物科学与工程学院, 陕西 汉中 723001

摘要：为构建水产致病菌溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核表达载体,优化ACFA蛋白的诱导表达条件,制备ACFA蛋白小鼠多克隆抗体。通过分子克隆获得ACFA蛋白的表达菌株,利用切胶纯化获得ACFA蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1:3 200倍,Western-Blotting法检测抗血清特异性较好。通过正交试验, 获得ACFA菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值0.5,加IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8 h,诱导温度32 ℃; 最佳培养条件为:葡萄糖浓度0,转速230 r/min,装液量50 mL。

关键词：溶藻弧菌,ACFA蛋白,正交试验,多克隆抗体,

基金资助：陕西省教育厅科学研究计划项目(2013JK0723);陕西理工学院人才启动项目(SLGQD13-15)