海带核基因组编码CbbX蛋白的原核表达与纯化

来源：华北农学报杂志2015年第2期北京时间：

作者：谢玮怡, 毕燕会, 周志刚

单位：上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306

摘要：为研究海带核基因组编码的nucCbbX蛋白的结构和功能,根据海带配子体核基因 cbbX (GenBank登录号:NP_053838)设计含有酶切位点的引物,通过RT-PCR方法获得末端连接Nde Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点的完整ORF。序列保守性分析表明,预测的海带成熟nucCbbX蛋白序列含具有AAA+结构域、Walker-A和Walker-B ATP结合位点及ATP水解酶和RuBisCo活化酶活性相关位点。序列相似度分析表明,海带nucCbbX与其质体基因组编码的ptCbbX和类球红细菌的 Rs CbbX蛋白氨基酸序列相似度均较低,分别为37.4%和36.8%,相比ptCbbX与 Rs CbbX相似度较高为57.6%。以 Rs CbbX蛋白单体晶体结构模型为模板,预测获得的海带nucCbbX蛋白三级结构中N端为一个α/β子域含有5个α螺旋和5个β折叠,C端为α螺旋子域含有5个α螺旋。为进一步研究海带nucCbbX蛋白晶体结构,通过双酶切和连接反应成功构建pET28a- cbbX 原核表达载体,并转化至BL21感受态细胞,获得pET28a- cbbX /BL21重组菌株。利用终浓度为1%的IPTG进行诱导后,重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子量为50.2 kDa,较nucCbbX成熟蛋白(44.7 kDa)大。重组蛋白经变性、纯化和复性后用于蛋白结晶,初步获得海带nucCbbX蛋白晶体。

关键词：海带,核基因组,CbbX,蛋白,表达与纯化,

基金资助：上海海洋大学一流学科海洋科学项目;国家高技术研究发展计划课题项目(2012AA10A406)