绵羊FecB基因的原核表达及其抗体制备

来源：华北农学报杂志2015年第3期北京时间：

作者：丁强, 张利平, 贾建磊, 王静, 张勇

单位：甘肃农业大学 动物科学技术学院, 甘肃 兰州 730070

摘要：为了进一步研究 FecB 基因,利用PCR-RFLP技术筛选出 FecB 基因,PCR扩增 FecB 基因编码区序列1 509 bp, 利用限制性内切酶 Bam H Ⅰ和EcoR Ⅰ定向插入原核表达载体pET30a(+),构建原核表达载体pET30a(+)- FecB,诱导表达纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,Western Blot检测重组蛋白的免疫活性,ELISA检测抗体效价。结果表明,成功的构建了绵羊 FecB 基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白,经过4次免疫后,获得多克隆抗体,ELISA方法检测小鼠抗体免疫效价达到1: 32 000,纯化的蛋白具有免疫活性。为研究绵羊 FecB 基因蛋白的功能提供参考。

关键词：<em>FecB</em>基因,原核表达,蛋白纯化,多克隆抗体制备,

基金资助：绵羊双羔性状分子调控机理研究项目(GNSW-2012~24);通过蛋白表达差异与动态组成研究绵羊双羔性状的信号分子及其调控机理项目(31260547)