类猪圆环病毒P1VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析

来源：华北农学报杂志2015年第4期北京时间：

作者：王凤芝, 温立斌, 何孔旺, 姚火春, 王小敏

单位：1. 江苏省农业科学院 兽医研究所, 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室, 国家兽用生物制品 工程技术研究中心, 江苏 南京 210014;；2. 南京农业大学 动物医学院, 江苏 南京 210095

摘要：为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1 基因,利用pFastBacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1 基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1 重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的 ORF1 基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。

关键词：P1 VP1,昆虫杆状病毒表达载体系统,RT-PCR,Western Blot,电镜,

基金资助：国家自然科学基金项目(31272574;30972184),江苏省农业科技自主创新项目(CX(14)2045)