拟南芥CPK10双元TAP载体的构建及原生质体表达

来源：华北农学报杂志2015年第4期北京时间：

作者：梁芸, 魏凤菊

单位：河北农业大学 生命科学学院, 河北省植物生理与分子病理学重点实验室, 河北 保定 071001

摘要：为了研究拟南芥CPK10发挥功能的分子机理,通过PCR扩增克隆了 CPK10 基因,将该基因连接到带有FLAG和HA标签的双元串联亲和层析载体上,构建成pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10 植物表达载体,进而通过PEG介导转化拟南芥野生型原生质体,表达约10 h,通过Western Blotting检测融合有FLAG和HA标签的CPK10蛋白的表达情况,结果显示,可以分别利用FLAG抗体和HA抗体特异检测到CPK10蛋白的条带。融合蛋白的成功表达,为进一步通过串联亲和纯化技术(TAP)筛选CPK10的互作蛋白奠定基础。

关键词：TAP,双元表达载体,<em>CPK10</em>,原生质体转化,

基金资助：国家自然科学基金专项基金项目(31040052);国家自然科学基金青年基金项目(31101022);中国农业大学开放课题(SKLPPBKF1504)