羊草脂氧合酶同源蛋白基因LcLHP的克隆与表达分析

来源：华北农学报杂志2015年第4期北京时间：

作者：张旸, 孙天旭, 郭勃予, 汤明威, 李玉花, 解莉楠

单位：东北林业大学 生命科学学院, 黑龙江 哈尔滨 150040

摘要：为验证羊草脂氧合酶同源蛋白基因 LcLHP 与盐胁迫的关系,利用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)克隆技术从羊草中克隆得到抗盐碱相关基因脂氧合酶同源蛋白基因(LHP,Lipoxygenase homology protein)的cDNA全长序列,其GenBank登录号为KJ472894。 LcLHP 基因开放阅读框为537 bp,编码178个氨基酸。LcLHP中含有PLAT/LH2结构域,该结构域蛋白家族的许多成员受胁迫诱导。同源性分析显示,LcLHP与互花米草PLAT/LH2家族蛋白脂氧合酶、PLAT植物胁迫结构域包含蛋白等同源性较高,蛋白功能预测显示其N 端可能存在信号肽并可能具有酶功能。RT-PCR分析显示,在一定盐碱胁迫条件下,随着处理试剂Na2CO3溶液处理时间的延长, LHP 基因在羊草中的表达量呈单峰趋势,在12 h时达到峰值;构建重组表达载体pGEX-LcLHP 并进行IPTG原核诱导表达培养,获得了GST-LcLHP融合蛋白并用GST抗体进行Western Blot试验得到验证。

关键词：羊草,盐碱胁迫,<em>LcLHP</em>,RACE克隆,表达分析,

基金资助：“十二五”农村领域国家科技计划课题项目(2013AA102706)