克隆山羊成纤维细胞系的建立与生物学特性的研究

来源：华北农学报杂志2015年第5期北京时间：

作者：刘通, 王恒, 李运生, 张运海

单位：安徽农业大学 动物科技学院, 安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室, 安徽 合肥 230036

摘要：为研究克隆黄淮白山羊耳部皮肤成纤维细胞(cGSF)的体外培养及其生物学特性。通过组织块接种培养法和胰蛋白酶消化法均可以获得原代cGSF,但在接种培养24 h后,组织块法收获的细胞贴壁率和细胞量要明显高于胰酶消化法。就生长特征而言,cGSF的生长曲线也呈现典型“S”型,到达指数增长期、平台期的时间分别为第3,6天,早于普通黄淮白山羊的皮肤成纤维细胞(GSF),后者分别为第4,8天。cGSF原代(P0)、第2代(P2)、第8代(P8)细胞的染色体数目异常率均高于相同代数的GSF。在相同转染条件下,cGSF在转染pEGFP-N1后,再经G418筛选亦可形成克隆点,扩增获得阳性细胞系。总之,源自克隆山羊的体细胞体外生长、转基因后的生物学特征有别于普通动物分离得到的细胞系。因此,利用来自克隆动物的体细胞开展研究,选择分离培养、纯化、转基因方法时需要适当调整。

关键词：体细胞克隆,山羊,成纤维细胞,生物学特性,

基金资助：国家“863”计划子课题(2011AA100307-04);国家科技重大专项(2014ZX08008-005)