棉花根系总蛋白质提取及双向电泳方法的改良

来源：华北农学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：王曼, 刘连涛, 孙红春, 张永江, 宋世佳, 陈静, 成国鹏, 李存东

单位：河北农业大学, 河北省作物生长调控实验室, 河北 保定 071001

摘要：对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良,以获得更好的分离效果,为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础.以鲁棉研28为材料,分别采用TCA/丙酮法、改良TCA/丙酮/SDS法、饱和酚-甲醇醋酸铵法这3种根系蛋白质提取方法,提取棉花幼苗根系总蛋白,并进行双向电泳进行蛋白质分离.在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对3种方法进行比较.利用饱和酚-甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白,其蛋白样品纯度高,SDS-PAGE电泳图谱清晰,蛋白点数量最多为601个点;TCA/丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为7.53 mg/g,但样品纯度低,SDS-PAGE电泳图谱模糊,蛋白点数量最少为417个点.采用考马斯亮蓝染色,上样量为1 500 μg获得的凝胶图谱效果较好.总之,适合棉花根系蛋白质提取的方法为饱和酚-甲醇醋酸铵法,在考马斯亮蓝染色蛋白质上样量为1 500 μg时能获得优良的分离效果.

关键词：棉花根系,蛋白质提取,双向凝胶电泳,蛋白质组,

基金资助：国家自然科学基金项目(31171495;31304720);河北省自然科学基金项目(C2014204072);河北省重点基础研究项目(10960206D);高等学校博士学科点专项(20121302110001)