毕赤酵母表达的猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白及其免疫原性分析

来源：华北农学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：张莉, 康雪燕, 章振华, 李永清, 盖丽丽, 姜世金, 张培君

单位：1. 北京市农林科学院 畜牧兽医研究所, 畜禽疫病防控技术北京市重点实验室, 北京 100097;；2. 山东农业大学 动物医学院, 山东 泰安 271018

摘要：为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白,利用毕赤酵母真核表达系统,表达猪传染性胃肠炎(河北分离株)的纤突糖蛋白.根据GenBank TGEV S 基因设计一对引物,经PCR扩增出长2.2 kb的目的基因S ,将S 基因亚克隆于pPIC9k载体,转化TOP10感受态,PCR、酶切鉴定阳性克隆,Sal Ⅰ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,然后电转GS115感受态,利用G418抗性进行多拷贝整合子初步筛选,提取基因组并做PCR鉴定,得到阳性菌株,经诱导发酵后,上清发酵液经SDS-PAGE电泳检测,显示获得分子量为82 kDa左右的目的蛋白,同时用Western-Blotting检测到一条特异的目的条带;用目的蛋白免疫小鼠, ELISA检测免疫S蛋白小鼠血清抗体效价为1 : 100,表达蛋白具有免疫活性.

关键词：毕赤酵母,猪传染性胃肠炎病毒,纤突糖蛋白<em>S</em>基因,免疫原性,

基金资助：北京市科技新星计划资助项目(2007B044)