油菜pgip基因去信号肽片段在毕赤酵母中的分泌表达

来源：华北农学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：皇甫海燕, 燕孟娇, 宋培玲, 郝丽芬, 皇甫九茹, 贾晓清, 李子钦

单位：内蒙古农牧业科学院, 内蒙古 呼和浩特 010031

摘要：为探讨PGIP蛋白与PG的互作及pgip 基因在油菜抗黑胫菌病中的作用,根据GenBank中油菜pgip9 、pgip15 CDS序列设计引物,并去掉信号肽序列,以接种黑胫病病原菌Leptosphaeria biglobosa (菌株NM-1) 7 d后油菜叶片总RNA反转录的cDNA为模板,PCR扩增出pgip9 、pgip15 除信号肽以外的编码区片段,并克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA中构建重组质粒pPICZαA-pgip9 、pPICZαA-pgip15 .重组质粒经单、双酶切、菌落PCR筛选鉴定后热激化法转化酵母细胞PMAD16,再经ZeocinTM的YPD平板和菌落PCR筛选鉴定,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测,均在36~37 kDa处出现单一的蛋白条带,蛋白分泌表达成功.通过对pgip 基因的体外表达,为探讨PGIP蛋白与PG的互作及pgip 基因在抗油菜黑胫菌病中的作用奠定基础.

关键词：<em>Leptosphaeria biglobosa</em>,<em>pgip</em>,去信号肽,毕赤酵母,分泌表达,

基金资助：内蒙古农牧业科学院青年创新基金项目(2013QNJJN01);内蒙古农牧业创新基金项目(2011CXJJN02-3)