柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的优化

来源：华北农学报杂志2016年第1期北京时间：

作者：王兴红, 李红叶

单位：1. 中国林业科学研究院华北林业实验中心, 北京 102300;；2. 浙江大学农业与生物技术学院, 浙江杭州 310058

摘要：为了获得最优柑橘黑斑病病原菌柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系,利用单因素试验法对反应体系中的5个因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)分别设置了不同的浓度梯度进行反应体系的优化。结果表明,在20μL反应体系中,含有1.5 mmol/L的Mg2+、0.15 mmol/L的dNTP、0.3μmol/L的引物、25 ng DNA模板、0.5 U Taq DNA聚合酶为最优。利用优化的ISSR-PCR反应体系对不同地理来源的21株柑橘叶点霉菌菌株进行扩增。结果表明,已建立的体系稳定可靠。柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术对柑橘叶点霉菌进行遗传分析奠定了基础。

关键词：柑橘叶点霉菌,ISSR,单因素试验法,柑橘黑斑病,

基金资助：国家现代农业(柑橘)产业技术体系建设专项资金(CARS-27)