甘蔗条纹花叶病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

来源：华北农学报杂志2016年第1期北京时间：

作者：翟玉山, 彭磊, 杨永庆, 邓宇晴, 程光远, 郑艳茹, 徐景升

单位：农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室, 福建农林大学, 福建福州 350002

摘要：为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上,获得了pGBKT7-HC-Pro、pGBKT7-P3N-PIPO、pGBKT7-CP和pGBKT7-VPg 4个诱饵载体。结果显示,将重组质粒转化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/AbA平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选,为探索SCSMV侵染机制和发病机理奠定了基础。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒,<em>HC</em>-<em>Pro</em>,<em>P3N</em>-<em>PIPO</em>,<em>CP</em>,<em>VPg</em>,诱饵载体,酵母双杂交,

基金资助：国家高技术研究发展计划"863计划"项目(2013AA102604);国家自然科学基金项目(31171605;31371688)