小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达

来源：华北农学报杂志2016年第1期北京时间：

作者：郭子平, 翟清华, 曾令锋, 邓西平, 杨淑慎

单位：1. 西北农林科技大学生命科学学院, 陕西杨凌 712100;；2. 西北农林科技大学黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室, 陕西杨凌 712100

摘要：为了研究催化活性半胱氨酸Cys154、Cys158残基对小麦细胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶(TaGAPC)蛋白酶活性的影响,利用重叠延伸PCR法分别将这2个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸,并分别连入pET28a(+)原核表达载体。在25℃条件下, TaGAPC及其定点基因TaCys154S/TaCys158S经0.25 mmol/L IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示,目标重组蛋白均为可溶性且大小约为40 kDa,与预测结果一致。在此基础上,经超声波破菌及镍柱纯化获得3种纯化重组蛋白。这为后续TaGAPC及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。

关键词：<em>TaGAPC</em>, 重叠延伸PCR,定点突变,原核表达,蛋白纯化,

基金资助：国家自然科学基金项目(31271625);黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室专项(10502)