棉花GbCBF2基因的克隆、互补表达载体的构建及遗传转化

来源：华北农学报杂志2016年第1期北京时间：

作者：孔丽颖, 李翔, 李才运, 刘晓东, 李月

单位：新疆农业大学农学院, 农业生物技术重点实验室, 新疆乌鲁木齐 830052

摘要：为研究棉花CBF2基因在植物抗逆中的作用,构建了pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T植物互补表达载体,并对拟南芥cbf2突变体进行遗传转化。以新海16 cDNA为材料,采用PCR的方法克隆4个棉花CBF2基因,同时克隆拟南芥CBF2基因启动子AtCBF2P和终止子AtCBF2T,并将这些基因与pBluescript SK载体连接,构建pBluescript SK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T中间过渡载体,用Sac Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切中间载体,获得AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T核心片段,将此片段插入到pCAMBIA1300表达载体中,构建pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T植物互补表达载体。以拟南芥cbf2突变体为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,获得转棉花CBF2基因群体。获得转基因株系后,将为筛选出棉花的CBF2抗冻负调控基因及棉花抗逆分子育种奠定基础。

关键词：棉花,<em>CBF2</em> 基因,互补表达载体,遗传转化,

基金资助：国家自然科学基金项目(31470289);新疆农业大学校前期课题(XJAU201311);新疆农业大学大学生创新项目