SPF鸡胚St3gal Ⅰ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

来源：华北农学报杂志2016年第2期北京时间：

作者：陆玉建, 吴信明, 管宇, 张松林, 李树芳, 韩文瑜, 沈志强

单位：1. 山东省滨州畜牧兽医研究院 博士后科研工作站, 山东 滨州 256600;；2. 吉林大学 博士后科研流动站, 吉林 长春 130062;；3. 滨州学院 生命科学系, 山东 滨州 256603;；4. 山东省滨州畜牧兽医研究院, 山东 滨州 256600;；5. 郑州大学 生命科学院, 河南 郑州 450001

摘要：为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3gal Ⅰ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3gal Ⅰ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3gal Ⅰ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在G418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3gal Ⅰ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3gal Ⅰ基因成功的插入到pCI-neo质粒,从而实现真核表达载体pCI-neo-St3gal Ⅰ的构建。在G418选择压力下,初步获得了稳转目的基因的MDCK细胞系。将抗性细胞混合克隆进行稀释,经选择后挑选出30个单克隆抗性细胞株。分别以转染细胞基因组DNA和总RNA为模板,经PCR检测显示,目的基因已整合入MDCK细胞的基因组中并可稳定的进行表达。

关键词：唾液酸,<em>St3gal Ⅰ</em>基因,MDCK,转染,G418,PCR,

基金资助：山东省自然科学基金项目(ZR2012CL14);山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研基金项目(BSH2014001)