小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建

来源：华北农学报杂志2016年第2期北京时间：

作者：许媛, 李铃仙, 魏春茹, 魏新燕, 于秀梅, 刘大群

单位：1. 河北农业大学 生命科学学院, 河北 保定 071001;；2. 河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心, 河北 保定 071001;；3. 河北省 植物生理与分子病理学重点实验室, 河北 保定 071001;；4. 河北农业大学 国家北方山区农业工程技术研究中心, 河北 保定 071001

摘要：SKP2A是调控细胞周期转录因子降解的F-box蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用,首先克隆获得中国春小麦Ta-SKP2A全长序列,然后将其与pGBKT7载体连接,转入酵母Y187感受态细胞中,构建酵母诱饵表达载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活效应。结果表明,Ta-SKP2A编码区序列长度为1146 bp,其ORF区编码一条由382个氨基酸组成的多肽。在ORF区两侧连接酶切位点(EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ),并将其与载体pGBKT7连接,成功构建了包含目的基因的诱饵载体pGBKT7-Ta-SKP2A,且含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,其过夜培养物OD600 > 0.8,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在二缺、三缺及四缺营养缺陷平板上不能生长,表明诱饵质粒的表达产物不能自激活报告基因。成功构建了一个包含Ta-SKP2A的重组诱饵质粒,为深入筛选与其互作的靶蛋白,研究其在小麦-叶锈菌互作体系中的作用机制奠定了基础。

关键词：小麦,F-box基因<em>SKP2A</em>,诱饵载体构建,毒性检测,自激活效应,

基金资助：国家自然科学基金项目(31301649);高等学校博士学科点专项科研基金项目(20121302120010)