蓖麻标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系的建立

来源：华北农学报杂志2016年第3期北京时间：

作者：赵永, 朱国立, 何智彪, 包春光, 陈晓凤, 姜桐桐, 李佳会, 黄凤兰, 周婷婷, 常旭丰, 刘佳琪

单位：1. 内蒙古民族大学 生命科学学院, 内蒙古 通辽 028000;；2. 通辽市农业科学研究院, 内蒙古 通辽 028000;；3. 内蒙古高校蓖麻产业工程技术研究中心, 内蒙古 通辽 028000;；4. 通辽市农畜产品质量安全中心, 内蒙古 通辽 028000;；5. 内蒙古蓖麻育种重点实验室, 内蒙古 通辽 028000

摘要：为了建立Lm型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系,提取不同类型不同发育时期的花序基因组DNA,混合成基因池;用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的组合,12h可将DNA酶切完全;16℃条件下,将酶切产物与EcoRⅠ、HpaⅡ/MspⅠ接头过夜连接;连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为10×PCRBuffer2.5μL、dNTPs(10mmol/L)2.5μL、Mg2+(25mmol/L)2.0μL、模板2.0μL、E0扩增引物(10pmol/μL)1.5μL、H0扩增引物(10pmol/μL)1.5μL、LATaq(5U/μL)0.25μL、ddH2O12.75μL。预扩增产物稀释10倍后用于选择性扩增。优化后的选择性扩增体系为10×PCRBuffer2.5μL、dNTPs(10mmol/L)2.0μL、Mg2+(25mmol/L)4.0μL、模板3.0μL、EX扩增引物(10pmol/μL)1.0μL、H/MX扩增引物(10pmol/μL)1.0μL、LATaq(5U/μL)0.30μL、ddH2O11.2μL。

关键词：蓖麻,花序,MSAP,

基金资助：国家自然科学基金项目(30760123;31160290;31460353);国家农业部公益性行业专项(201003057);内蒙古自治区高等学校"青年科技英才支持计划"(NJYT-14-A10);内蒙古自治区科技创新引导项目;内蒙古自治区"草原英才"计划项目;市校合作项目(SXZD2012018;SXZD2012017;SXZD2012006);内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心开放基金项目(BMYJ2011009)