蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测

来源：华北农学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：毛玉梅, 李琴, 付鸣佳, 金华燕, 沈俊良, 钟雪晴

单位：江西师范大学 生命科学学院, 江西 南昌 330022

摘要：为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶（Subtilisin-like protease）的表达特性，以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象，通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列，并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法，检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析，表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域（143～429）和1个前体蛋白转化酶P功能域（514～600），符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射，Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果，即在持续的蓝光照射48～50 h时，出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。

关键词：蛹虫草,<em>CmKexin</em>基因,类枯草杆菌蛋白酶,Northern杂交,实时荧光定量PCR,

基金资助：国家自然科学基金项目（31060004；31260010）