绣球SSR-PCR反应体系的建立与优化

来源：华北农学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：贾新平, 孙晓波, 梁丽建, 邓衍明, 苏家乐, 周建涛

单位：江苏省农业科学院 园艺研究所, 江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室, 江苏 南京 210014

摘要：为了建立适合绣球的SSR-PCR反应体系，采用正交设计L25（56）对影响SSR-PCR反应体系的5个主要因素（Mg2+、dNTPs、引物、DNA模板和Taq聚合酶）在5个水平上进行优化，筛选出每个因素的最佳水平，建立适合绣球的SSR-PCR反应体系。结果表明，20 μL的SSR-PCR反应体系中，DNA模板用量为60 ng，Mg2+浓度为1.5 mmol/L，dNTPs浓度为0.3 mmol/L，引物浓度为0.4 μmol/L，Taq聚合酶用量为0.8 U。扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，最佳温度退火40 s，72℃ 1 min，33个循环；72℃延伸10 min，4℃保存。选用10个绣球品种对建立的SSR-PCR反应体系进行验证，结果表明该体系具有较好的稳定性和通用性。建立和优化的绣球SSR-PCR反应体系，为应用SSR分子标记技术开展绣球属植物遗传育种研究提供了理论依据和技术参考。

关键词：绣球,SSR-PCR,正交设计,反应体系,

基金资助：江苏省科技支撑计划项目（BE2014408）；江苏省农科院成果转化与推广项目（KF15（5005））