番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达

来源：华北农学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：韩磊, 迟胜起, 张剑峰

单位：青岛农业大学 农学与植物保护学院, 山东 青岛 266109

摘要：为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）抗血清，以番茄病叶为试验材料，提取总RNA，根据ToCV CP基因设计特异性引物，利用RT-PCR方法克隆目的基因，构建原核表达载体pET32a-ToCVCP，在大肠杆菌Rosetta （DE3）菌株中表达CP蛋白。结果表明：ToCV CP基因（GenBank登录号：KT809400）全长774 bp，编码257个氨基酸，与GenBank中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97.2%～99.6%，推导的氨基酸序列同源性为97.3%～100.0%。核苷酸序列保守位点占全部位点的91.3%，氨基酸序列保守位点占全部位点的88.3%，表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的CP基因保守性较高。将ToCV CP基因克隆到原核表达载体pET-32a （+）上，并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE分析表明，转pET32a-ToCVCP载体的大肠杆菌Rosetta （DE3）菌株表达了分子量约33 kDa的重组蛋白。该重组蛋白在37℃，1.0 mmol/L IPTG、诱导6 h，表达量最大。

关键词：番茄褪绿病毒,外壳蛋白基因,原核表达,基因克隆,

基金资助：山东现代农业产业技术体系薯类创新团队项目（SDAIT-10-011-06）