白菜型冬油菜叶片质外体蛋白提取及响应低温胁迫的蛋白表达分析

来源：华北农学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：袁金海, 刘自刚, 孙万仓, 曾秀存, 马骊, 方园, 刘海卿, 郭仁迪, 王治江, 陈奇, 王凯音, 刘林波

单位：1. 甘肃省油菜工程技术研究中心, 甘肃 兰州 730070;；2. 甘肃农业大学 农学院, 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室, 甘肃省干旱生境作物学重点实验室, 甘肃 兰州 730070;；3. 河西学院农业与生物技术学院, 甘肃 张掖 734000

摘要：为了研究质外体蛋白在低温胁迫下白菜型冬油菜抗寒的作用机理，以陇油7号五叶期叶片为试材，采用2种不同提取液（提取液A：0.1 mol/L pH值=7.6 Tris-HCl、0.2 mol/L KCl、1 mmol/L PMSF，提取液B：0.05 mol/L pH值=7.6 Tris-HCl、0.01 mol/L EDTA-Na2、0.02 mol/L Vc、1 mmol/L PMSF）进行质外体蛋白提取效果比较。结果表明：提取液A的蛋白提取率达到了（0.073±0.004 6） mg/g，比提取液B提高了42.88%；经六磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性检测，提取液A提取的蛋白质污染率较提取液B低0.91%；双向电泳第一向等电聚焦IEF中，提取液A提取的蛋白质不仅除盐时间较提取液B短4.5 h，且获得的凝胶图谱清晰；通过丰度计算，得到陇油7号低温胁迫（4℃，48 h）后具有显著差异的蛋白点339个，其中表达量变化在2倍以上的蛋白点为46个，包括上调表达蛋白点18个，下调表达蛋白点21个，特异性表达蛋白点7个，推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫有关。对特异表达的7个蛋白点进行质谱分析鉴定，得到与低温胁迫相关的蛋白，为白菜型冬油菜超强抗寒品种陇油7号抗寒相关分子机理的研究奠定了基础理论。

关键词：质外体,陇油7号,蛋白,双向电泳,

基金资助：国家“863”高技术研究发展计划项目（2011AA10A104）；国家自然科学基金项目（31460356）；国家“973”计划项目（2015CB150206）；国家农业科技成果转化项目（2014G10000317）；国家自然基金项目（31560397）；甘肃省自然基金项目（145RJZG050）