基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变

来源：华北农学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：蒲艳, 刘超, 林琪, 李继洋, 刘晓东

单位：新疆农业大学 农学院, 农业生物技术重点实验室, 新疆 乌鲁木齐 830052

摘要：运用PCR定点突变技术对载体pBluescript Ⅱ SK（+）以及植物表达载体pCAMBⅠA1300多克隆位点内相关的酶切位点进行改造，为运用CRISPR/Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过酶切鉴定以及测序表明，成功将pBluescript Ⅱ SK（+）载体多克隆位点内Xho Ⅰ、Eco R Ⅴ、Sma Ⅰ、Sac Ⅱ 4个酶切位点，分别改造为Nhe Ⅰ、Mfe Ⅰ、Nsi Ⅰ、Pac Ⅰ；将pCAMBⅠA1300植物表达载体多克隆位点内的Sac Ⅰ、Sal Ⅰ以2个酶切位点分别改造为Nsi Ⅰ、Pac Ⅰ，为今后构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究奠定一定的理论基础。

关键词：pBluescript Ⅱ SK(+),pCAMBⅠA1300,定点突变,PCR,

基金资助：国家自然科学基金项目（31560534）