花生AhPLDα基因植物过表达载体构建及对拟南芥的遗传转化
来源：华北农学报杂志2016年第6期北京时间：
作者：刘义杰, 陈四龙, 程增书, 王瑾, 宋亚辉, 郝军会, 张朋娟, 李玉荣
单位：河北省农林科学院 粮油作物研究所, 河北省作物遗传育种实验室, 河北 石家庄 050035
摘要：为了明确花生AhPLDα基因在响应干旱胁迫信号传导中的功能和作用机制，以ABA处理的冀花4号花生叶片cDNA为模板，用RT-PCR方法扩增AhPLDα1和AhPLDα2的全长CDS片段，采用酶切-连接的方法分别将这2个基因定向克隆到植物表达载体pBar-F3上，冻融法将重组子转入根癌农杆菌GV3101，利用改良Floral-dip法将过表达质粒转入拟南芥。菌落PCR和酶切结果表明，CaMV35S启动子驱动的过表达载体重组质粒pBar-AhPLDα构建正确。通过RT-PCR和qRT-PCR验证，表明AhPLDα1和AhPLDα2基因整合到拟南芥基因组中并能过量表达，获得了阳性转基因纯合株系。干旱胁迫试验表明，转基因植株的耐旱性较野生型明显增强。可见，AhPLDα基因参与了干旱胁迫应答过程，是转基因途径提高作物耐旱性的潜在候选基因。
关键词：花生,<em>AhPLDα</em>基因,植物表达载体,转基因,干旱胁迫信号,
基金资助：国家自然科学基金项目（31201239；31301354）；河北省重点基础研究项目（10960122D）；河北省博士基金项目（F14E055610）；现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-14）
