小鼠FABP4基因启动子驱动红色荧光蛋白载体的构建及在牛体细胞中的表达

来源：华北农学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：岳永莉, 于海泉

单位：内蒙古大学 哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室, 内蒙古 呼和浩特 010021

摘要：小鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白（FABP4）的启动子/增强子元件是脂肪组织特异性启动元件，为了鉴定该元件在牛体细胞中的启动效果，首先以小鼠肝脏DNA为模板，通过PCR克隆得到5.9 kb的FABP4基因启动子片段，连入pMD19-T载体后进行酶切及测序鉴定，经EcoT 22I酶切去除非核心启动子区后精简为2.3 kb的片段，通过Sac Ⅱ酶切将5.9 kb片段和2.3 kb片段的启动子连入红色荧光蛋白载体pDs-Red 2-1的多克隆位点，构建为表达质粒pMF5.9-Red和pMF2.3-Red，利用脂质体法将上述载体分别转染牛脂肪间充质干细胞及牛胎儿成纤维细胞，24 h后实时定量PCR检测红色荧光蛋白转录水平。结果表明，克隆得到的5.9 kb小鼠FABP4启动子片段酶切及测序结果正确，与红色荧光蛋白载体相连的载体pMF5.9-Red和pMF2.3-Red酶切结果与预期相符，表达载体构建成功，实时定量PCR结果显示以上2种细胞在转染后24 h红色荧光蛋白均有表达，且pMF2.3-Red的转录水平是pMF5.9-Red的2倍以上。成功构建了小鼠FABP4启动子驱动红色荧光蛋白表达载体pMF5.9-Red和pMF2.3-Red，5.9 kb片段和2.3 kb片段均可驱动外源基因在牛体细胞中转录，且2.3 kb片段启动效率高于5.9 kb片段。

关键词：小鼠<em>FABP4</em>启动子,载体构建,牛体细胞,

基金资助：转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX08010005）