副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法的建立及应用

来源：华北农学报杂志2016年第S1期北京时间：

作者：宋帅, 李春玲, 臧莹安, 郭海祥, 李淼, 杨冬霞, 徐志宏

单位：1. 广东省农业科学院 动物卫生研究所, 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室, 广东省兽医公共卫生实验室, 粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心, 广东 广州 510640;；2. 仲恺农业工程学院 动物科学系, 广东 广州 510225

摘要：为了建立一种准确、快速的副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法，以副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的特异性单克隆抗体1E2作为捕获抗体，兔抗副猪嗜血杆菌多克隆抗体作为检测抗体，通过方阵滴定优化夹心ELISA检测方法最佳反应条件，并对该检测方法进行特异性、敏感性验证以及临床样品的检测应用。结果显示，该检测方法中单克隆抗体1E2最佳包被浓度为3.434 μg/mL，兔抗副猪嗜血杆菌多抗的最佳稀释浓度为3.350 μg/mL，用10 mg/mL明胶37℃封闭1 h优于其他封闭液，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多体最佳使用浓度为1：4 000。该检测方法的特异性试验结果显示可检测出15个血清型的副猪嗜血杆菌病原，而与其他病原菌的检测结果均为阴性。敏感性试验结果显示该方法能够检测出副猪嗜血杆菌的最低菌落浓度为1×106 cfu/mL。利用该检测方法对临床115份副猪嗜血杆菌可疑病料进行检测结果显示可检出83份阳性样品，检出的阳性样品数高于细菌分离及PCR鉴定方法。上述结果表明所建立的副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法特异性强、敏感性好并可应用到临床样品的检测。

关键词：副猪嗜血杆菌,单克隆抗体,夹心ELISA,

基金资助：广东省公益研究与能力建设专项资金（2014B070706011；2015B070701015）；广东省农业领域科技计划项目（2013B020307002）；广州市新型畜禽疫病诊断试剂研发及产业化（201508020055）；广州市重大民生专项（201300000066）；国家“十二五”科技支撑计划项目（2015BAD12B02-4）