藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达

来源：华北农学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：张飞燕, 王振华, 潘康成, 唐慧琴, 谷笑笑, 李伟

单位：1. 四川农业大学 动物医学院, 动物微生态研究中心, 四川 成都 611130;；2. 成都农业科技职业学院, 四川 成都 611130

摘要：旨在克隆藏猪胰岛素样生长因子1（IGF-1）的成熟肽基因，并进行原核表达的研究。提取藏猪肝脏组织RNA，通过RT-PCR扩增出藏猪IGF-1全长基因，构建重组质粒pMD19-T-IGF-1，以pMD19-T-IGF-1质粒为模板，克隆IGF-1成熟肽序列并构建成熟肽pET-32α-IGF-1表达质粒，转入大肠杆菌BL21（DE3），对IPTG诱导剂浓度和诱导时间进行优化，Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western Blot对其鉴定。结果显示，IGF-1成熟肽基因（315 bp），成功构建了成熟肽pET-32α-IGF-1原核表达质粒；重组大肠杆菌BL21-IGF-1以包涵体形式表达出分子量约31 kDa融合蛋白，最优IPTG浓度为0.5 mmol/L，最佳IPTG诱导时间为10 h；纯化获得了高纯度的融合蛋白，经鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白。结果表明，成功构建了表达质粒pET32α-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF-1，表达了藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白及该蛋白具有抗原抗体反应活性。

关键词：藏猪,胰岛素样生长因子1,原核表达,蛋白纯化,蛋白质印迹法,

基金资助：四川省高等学校科技创新团队资助项目（KM406183.1）；全国大学生创新训练计划项目（201410626028）