灰葡萄孢BcKMO基因的原核表达分析

来源：华北农学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：王敏, 刘媛媛, 周帆, 姜婷婷, 郑旭, 张靖, 时翠平, 邢继红, 董金皋

单位：河北农业大学, 真菌毒素与植物分子病理学实验室, 河北 保定 071001

摘要：为构建灰葡萄孢犬尿氨酸单加氧酶（BcKMO）基因的原核表达载体并进行高效表达，获得纯化的BcKMO蛋白。以灰葡萄孢野生型BC22为试材，通过反转录PCR扩增BcKMO基因，回收BcKMO基因片段克隆到pMD19-T载体中，测序正确后，酶切pMD19-T-BcKMO和带有GST标签蛋白的pGEX4T-1质粒，将目的片段进行连接，构建BcKMO基因的原核表达载体pGEX4T-1-BcKMO-GST。经酶切和测序鉴定正确后，将构建好的原核载体转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导，在大肠杆菌BL21菌株中成功表达了与GST标签蛋白融合的BcKMO蛋白，大小约71 kDa。SDS-PAGE分析表明，该蛋白在0.2 mmol/L IPTG诱导12 h时高效表达；Western Blot结果发现目的蛋白能与GST特异性抗体起特异性反应，表明BcKMO基因的体外诱导表达成功。

关键词：灰葡萄孢,<em>BcKMO</em>,原核表达,纯化,PCR,

基金资助：河北省高等学校科学技术研究项目（ZD2016001）