马铃薯A病毒重组CP多克隆抗体的制备及其在DAS-ELISA检测中的应用

来源：华北农学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：宋志成, 费新敏, 杨煜, 乔利仙, 王晶珊, 李广存, 郭宝太

单位：1. 青岛农业大学 生命科学学院, 山东省植物生物技术高校重点实验室, 山东 青岛 266109;；2. 山东省农业科学院 蔬菜花卉研究所, 山东 济南 250100;；3. 中国农业科学院 蔬菜花卉研究所, 北京 100081

摘要：利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体，并将其用于DAS-ELISA检测。以pET22b（+）为起始载体，构建了PVA-CP基因的原核表达载体pET22b-ACP，重组菌BL21（pET22b- ACP）经IPTG诱导表达出了分子量为30 kDa的特异性重组CP。利用高纯度重组CP为抗原免疫家兔，制备出了效价为1：512 k的抗血清。以PVA重组CP为抗原，用间接ELISA与直接ELISA分别测定重组CP纯化抗体（IgG）及其碱性磷酸酶标记物（IgG-AP）的活性，用DAS-ELISA测定2种抗体的活性，目测及OD值测定结果表明3种ELISA测定反应都呈阳性。以PVA病毒阳性标准物为抗原，在上述3种ELISA测定中也呈阳性反应，重组CP多克隆抗体及其酶标抗体与PVA有较强的反应信号。利用重组CP制备的多克隆抗体及其酶标抗体达到了马铃薯A病毒DAS-ELISA检测的要求。

关键词：马铃薯A病毒,重组CP,多克隆抗体,酶标记抗体,DAS-ELISA检测,

基金资助：山东省农业产业体系薯类创新团队遗传育种岗位基金项目（SDAIT-10-022-03）；济南市国际科技合作计划项目（2014003054）