籽粒苋C4关键酶丙酮酸磷酸双激酶基因的原核表达及酶活性测定
来源：华北农学报杂志2017年第2期北京时间：
作者：贺飞燕, 闫建俊, 白云凤, 冯瑞云, 张维锋
单位：1. 山西大学 生物工程学院, 山西 太原 030006;；2. 山西省农业科学院 作物科学研究所, 作物遗传与分子改良山西省重点实验室, 农业部黄土高原作物基因资源与种质创制重点实验室, 山西 太原 030031
摘要：为了进一步探究籽粒苋丙酮酸磷酸双激酶（AhPPDK）蛋白的作用机制，构建了AhPPDK基因的原核表达载体，通过碱裂解提取质粒，经限制性内切酶酶切，采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，选择正确表达的阳性重组子，将测序正确的重组质粒pEASY-E1-AhPPDK转化菌株Transetta（DE3）；利用IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳分析表明，重组AhPPDK能在大肠杆菌Transset（DE3）中高效表达，表达的重组蛋白质分子量约为108 kDa，与预期分子量相符，且为可溶性蛋白。利用紫外分光光度法测量结果表明，原核表达的AhPPDK具有酶活性，且上清粗酶液活性高于沉淀粗酶液。研究结果可为进一步探明AhPPDK蛋白的作用机制和转基因利用奠定基础。
关键词：籽粒苋,AhPPDK,原核表达,酶活测定,
基金资助：国家自然科学基金项目（30971838）；山西省自然科学基金项目（201601D011075）
