萼脊兰MADS-box基因的克隆及表达载体构建

来源：华北农学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：蒋素华, 黄萍, 王默霏, 梁芳, 许申平, 崔波

单位：1. 郑州师范学院 生物工程研究所, 河南 郑州 450044;；2. 河南农业职业学院, 河南 郑州 451450

摘要：为了研究"ABC"模型的B类PI基因，探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。采用CTAB法提取萼脊兰花瓣总RNA，并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列，该序列长度为633 bp，编码210个氨基酸，与小兰屿蝴蝶兰的氨基酸相似性最高。对PI所表达蛋白质的结构、亲水性和二级结构进行了分析，结果显示，该基因包含MADS-box和K-box保守结构域，属于MADS-box基因家族；该蛋白分子属于亲水性蛋白，包含56.19%α螺旋、13.81%的延伸链以及30%的不规则折叠，实时荧光定量PCR结果显示，PI基因主要在花器官中表达，且表达量高，说明PI基因的表达具有组织特异性。构建植物表达载体的结果显示，目的基因和带启动子的片段已插入到表达载体pCAMBIA1301中，表明成功构建植物表达载体1301-PI，为最终获得新奇花型的萼脊兰奠定基础。

关键词：萼脊兰,<em>PI</em>基因,克隆,表达分析,表达载体,

基金资助：郑州市科技发展计划项目（20150448）；郑州市重大科技专项（141PZDZX038）；河南省教育厅重点科研项目（14B180036）