鲤鱼2种脂酰辅酶A脱氢酶基因cDNA克隆、表达及活性研究

来源：华北农学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：喻文娟, 俞菊华, 李红霞, 李建林, 唐永凯, 于凡, 何枫, 傅纯洁

单位：1. 南京农业大学 无锡渔业学院, 江苏 无锡 214081;；2. 中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心, 农业部淡水鱼类 遗传育种和养殖生物学重点开放实验室, 江苏 无锡 214081;；3. 东海县水产技术推广站, 江苏 东海 222300

摘要：为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制，使用RT-PCR在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长cDNA序列，阅读框分别为1 275，1 326 bp，编码424，441个氨基酸，分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列：FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等，与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明，MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达；不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响，但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激作用。此外，构建了原核表达载体MCADs-pEASY（E2）和LCADs-pEASY（E2），经IPTG诱导获得了原核表达蛋白，分子量分别为43.0，43.6 kDa。经检测这2个蛋白在370，450 nm处有明显的吸收峰，表明他们能自然结合FAD辅基。吩嗪硫酸甲酯反应法结果表明：MCAD和LCAD酶活性最适温度均为28℃，酶活分别为9.12，10.29 U/g。结果表明，与哺乳动物类似，鲤鱼MCAD和LCAD在肝脏和心脏表达量高；高不饱和脂肪酸对LCAD的表达有促进作用。

关键词：鲤鱼,<em>MCAD</em>,<em>LCAD</em>,克隆,原核表达,酶活性,

基金资助：中国水产科学研究院基本科研业务费专项课题（2016HY-ZD0303）；江苏省水产三新工程项目（Y2015-4）；中央级基本科研业务费项目（2015JBFM10）