猪DDX21基因的克隆、序列分析及原核表达

来源：华北农学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：谢立兰, 安康, 陈力, 孙紫德, 方六荣

单位：1. 武汉生物工程学院 应用生物技术研究中心, 湖北 武汉 430415;；2. 湖北省病毒载体工程技术研究中心, 湖北 武汉 430415;；3. 河北北方学院 医学检验学院, 河北 张家口 075000;；4. 华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室, 湖北 武汉 430070

摘要：DEAD-box解旋酶21（DExD-box helicase 21，DDX21）是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一，不仅参与RNA的合成和加工过程，同时还参与机体的天然免疫应答，调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能，以猪肾传代细胞（PK-15）总cDNA为模板，根据GenBank公布的预测序列（XM_005657387.2）设计引物扩增猪源DDX21基因，并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示，首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列（GenBank登录号为KX396051），其开放读码框全长为2 355 bp，编码784个氨基酸；与牛、斑马鱼、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分别为91.7%，57.5%，88.0%，82.3%，83.8%和48.9%；该基因编码的蛋白结构域和人、牛、小鼠、大鼠一样，其C端都具有保守的GUCT结构域；系统进化树分析表明猪DDX21与牛DDX21的亲缘关系最近。进一步构建原核表达质粒pET28a-DDX21，经测序鉴定正确后，将其转化感受态细胞BL21（DE3），对DDX21基因进行原核表达。经SDS-PAGE分析显示重组菌可表达分子量约为90 kDa的融合蛋白，与预期相符；在IPTG诱导浓度一定的条件下，重组菌的最佳诱导时间为5 h。猪DDX21基因的克隆和原核表达，为进一步研究DDX21蛋白的结构和生物学功能奠定了基础。

关键词：猪,<em>DDX21</em>基因,克隆,序列分析,原核表达,

基金资助：国家自然科学基金项目（31402181）；湖北省教育厅科学技术研究项目（B2016303）