花生膜联蛋白基因AhAnn1的克隆与表达分析

来源：华北农学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：丁红, 戴良香, 秦斐斐, 慈敦伟, 宋文武, 张智猛

单位：山东省花生研究所, 山东 青岛 266100

摘要：为挖掘花生抗逆境胁迫相关基因，克隆抗逆相关膜联蛋白Annexin基因，以花生品种花育25号为试验材料，从已知抑制消减杂交文库中获得花生膜联蛋白Annexin类似基因片段，通过RACE技术获得Annexin基因5'-RACE片段。对5'-RACE序列和抑制消减杂交文库中已知基因片段进行拼接，设计特异引物通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增得到该基因，命名为AhAnn1。结果表明，AhAnn1全长为1 277 bp，开放阅读框为951 bp。根据编码区预测AhAnn1编码一条316个氨基酸组成的多肽，预测分子量为36.10 kDa，等电点为7.07。预测该基因编码的蛋白含有膜联蛋白Annexin保守结构域，定位于细胞质中。蛋白序列多重比对和系统发育分析表明，花生与大豆、苜蓿、鹰嘴豆等豆科植物中的膜联蛋白相似性最高，亲缘关系最近。荧光实时定量PCR结果显示，AhAnn1在根系和叶片中的表达量随干旱胁迫程度的增加而增加。由此推测AhAnn1是一种干旱胁迫应答基因，在花生逆境调控中发挥作用。结果为进一步研究花生AhAnn1基因的功能和花生抗逆境胁迫相关分子机理提供了理论基础。

关键词：花生,膜联蛋白基因,干旱,系统发育分析,荧光定量PCR,

基金资助：山东省农业科学院青年英才培养计划项目；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金项目（BS2012NY010）；国家自然科学基金项目（31201171）；山东省现代农业产业技术体系花生创新团队（SDAIT-04-06）