利用酵母单杂交筛选拟南芥AtSTK基因表达调控蛋白的研究

来源：华北农学报杂志2017年第4期北京时间：

作者：杨歌, 惠颖, 赵翠, 田梦涵, 任媛媛, 黄占景, 葛荣朝

单位：1. 河北师范大学 生命科学学院, 河北 石家庄 050024;；2. 石药集团 中奇制药技术有限公司, 河北 石家庄 050035

摘要：拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因AtSTK的过量表达可以明显提高拟南芥的耐盐性。为进一步研究AtSTK基因表达的调控机制，以拟南芥基因组DNA为模板设计引物，扩增获得AtSTK基因的启动子序列，并构建到报告载体pAbAi，将重组报告载体质粒pAbAi-HYT利用Bst bⅠ进行单酶切线性化，转化酵母菌株Y1H Gold，线性化的pAbAi-HYT整合到基因组中。然后，将纯化的拟南芥双链cDNA、pGADT7-Rec载体共转化含有报告载体pAbAi-HYT的酵母菌，将菌液涂布到含有100 ng/mL AbA的SD/-Leu培养基上进行阳性克隆的酵母单杂交筛选。通过回复鉴定、序列测定，最终筛选获得了可能参与AtSTK基因表达调控的4个拟南芥基因。测序结果表明，酵母单杂交筛选获得的拟南芥基因AT3G32090含有WRKY转录因子保守结构域，为WRKY类转录因子的一员。因此，AtSTK基因的表达很可能接受MAPK信号传导途径中AT3G32090基因编码的WRKY类转录因子的调控，从而影响拟南芥植株的耐盐性。

关键词：<em>AtSTK</em>,启动子,表达调控蛋白,酵母单杂交,

基金资助：国家自然科学基金项目（30900104）；河北省自然科学基金项目（C2016205158）