拟南芥蛋白激酶SnRK1.1对转录因子FD的磷酸化分析

来源：华北农学报杂志2017年第4期北京时间：

作者：袁敏, 葛伟娜, 王莉, 张岚, 张家琦

单位：华北理工大学 生命科学学院, 基因组学与计算生物学研究中心, 河北 唐山 063000

摘要：为了获得纯化的SnRK1.1与FD蛋白，分析蛋白激酶SnRK1.1是否能够磷酸化开花调控途径中的转录因子FD，成功克隆了1 608 bp的SnRK1.1基因以及858 bp的FD与FD-T282A基因，分别与PGEX-4T-3载体连接，获得原核表达载体GST-SnRK1.1、GST-FD和GST-FD-T282A，并分别转化大肠杆菌BL21菌株；SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色（CBB）表明，0.5 mmol/L IPTG能够成功诱导出GST-SnRK1.1、GST-FD和GST-FD-T282A蛋白。利用GST纯化介质纯化获得了84 kDa的GST-SnRK1.1蛋白以及58 kDa的GST-FD与GST-FD-T282A融合蛋白；利用体外磷酸化体系证实SnRK1.1能够磷酸化FD，不能磷酸化突变的FD-T282A。研究结果为进一步解析SnRK1.1通过磷酸化转录因子FD参与开花途径调控的机制奠定了良好的基础。

关键词：SnRK1.1,FD,蛋白激酶,转录因子,磷酸化,

基金资助：国家自然科学基金项目（31401212）；河北省自然科学基金项目（C2014209134）；唐山市科技局项目（15140202a）