鸭梨PbChi Ⅱ的克隆与表达分析

来源：华北农学报杂志2017年第5期北京时间：

作者：李朋朋, 吴运东, 叶嘉, 李丹花, 乔莉娟, 张玉星, 董金皋

单位：1. 邯郸学院 生命科学与工程学院, 河北 邯郸 056005;；2. 河北农业大学, 河北 保定 071001

摘要：为明确几丁质酶在鸭梨抗病过程中的作用，以鸭梨为试材，提取总RNA，采用RT-PCR方法克隆几丁质酶基因PbChi Ⅱ ，分析PbChi Ⅱ 在梨黑星病菌诱导下的表达模式，构建原核表达载体pET30a-PbChi Ⅱ ，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中表达PbChiⅡ蛋白，分析重组蛋白在非生物胁迫下的生长能力。结果表明：PbChi Ⅱ 基因全长（基因登录号：KP876485）969 bp，实时定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）分析显示，PbChi Ⅱ 基因的表达受病原菌的调控，在供试的96 h内，梨黑星病菌可诱导该基因表达，且表达量在48 h达到最高。将PbChi Ⅱ 基因成功克隆到原核表达载体pET30a上，SDS-PAGE分析表明，该重组蛋白在37℃，1.0 mmol/L IPTG诱导2 h，表达量最大。转pET30a-PbChi Ⅱ载体的大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达了分子量约35.53 kDa的重组蛋白。诱导的蛋白可增强菌体在NaCl、CuCl2、CdCl2和ZnSO4等非生物胁迫下的生长能力。为进一步探索PbChi Ⅱ 基因的功能提供了基础资料。

关键词：鸭梨,几丁质酶基因,原核表达,非生物胁迫,表达模式,

基金资助：邯郸学院自然科学基金项目（16101）；邯郸市科技局项目（1627201054-2）；河北省高校冀南太行山区野生资源植物应用技术研发中心