黑曲霉糖化酶基因克隆及在酿酒酵母中的表达

来源：华北农学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：刘加爱, 陈蕾, 林元山, 张小鹃, 邹洪彬, 张学文

单位：湖南农业大学 生物科学技术学院, 湖南 长沙 410128

摘要：为了以酿酒酵母S78为宿主菌异源高效表达糖化酶基因，进一步扩大糖化酶基因在工业生产上的应用。运用RT-PCR法从黑曲霉中克隆得到糖化酶基因（glaA） cDNA，去除其信号肽编码区后的序列重组到酵母表达载体pVT102U/α ADH1强启动子下游，并与α因子分泌肽信号序列融合。用PEG/LiAc法将构建的重组表达载体转入酿酒酵母S78菌株，筛选出的转化菌点种到可溶性淀粉平板上培养，用碘染法鉴定重组基因的表达情况。鉴定出了典型水解圈的酵母转化子，转化子接种到YPD培养基中摇瓶培养后，取发酵上清液经SDS-PAGE检测到分子量大小约为80 kDa的目标蛋白带，上清液用DNS法检测其淀粉酶最高酶活为28.86 IU/mL。表明糖化酶基因已在酿酒酵母S78中成功表达并能有效分泌到细胞外。

关键词：黑曲霉,糖化酶,酿酒酵母,异源表达,

基金资助：湖南农业大学生物科学技术学院大学生创新项目（sky201503）