山羊KLF9基因克隆及在组织细胞中的表达

来源：华北农学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：赵越, 林亚秋, 朱江江, 林森, 池永东, 刘鲁蜀, 王永

单位：1. 西南民族大学 生命科学与技术学院, 四川 成都 610041;；2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 四川 成都 610041

摘要：旨在克隆山羊Kruppel样转录因子9（Kruppel-like factor 9，KLF9），阐明其在山羊各组织及其脂肪细胞中的表达模式，为深入探究KLF9基因对山羊肌内脂肪（Intramuscular fat，IMF）沉积的调控作用奠定理论基础。利用胶原酶消化法获得7日龄简州大耳羊羔羊肌内前体脂肪细胞。选成年简州大耳羊与藏山羊各4只，用RT-PCR法克隆山羊KLF9基因，用实时荧光定量PCR方法检测KLF9基因在山羊背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织中的相对表达水平及KLF9基因在成脂诱导分化0，2，4，6 d的前脂肪细胞中的表达水平。结果显示，获得山羊KLF9基因全长891 bp，其中包括CDS区735 bp，5'UTR序列86 bp，3'UTR序列70 bp，编码244个氨基酸。山羊KLF9氨基酸序列与藏山羊相似性为99.73%，与牛、猪、人、鼠的相似性高达99.18%~97.54%。组织表达结果显示，简州大耳羊肝脏和皮下脂肪的KLF9基因相对表达量极显著高于其他各个组织（P <0.01）；藏山羊肺脏的KLF9基因表达水平极显著高于其他各个组织（P <0.01）。细胞表达检测发现，成脂诱导2 d的KLF9基因前脂肪细胞表达水平极显著高于诱导分化前（P<0.01）。在获得山羊KLF9基因序列基础上，发现了其组织表达模式具有品种特异性，推测其可能在山羊前体脂肪细胞分化早期发挥调控作用。

关键词：山羊,<em>KLF9</em>,克隆,组织表达,肌内前体脂肪细胞,

基金资助：国家自然科学基金面上项目（31672395）；四川省科技支撑计划“十三五育种攻关”项目（2016NYZ0045）；西南民族大学研究生创新型科研项目（CX2017SZ038）