大白菜基因组DNA快速提取方法的研究

来源：华北农学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：王涛, 王超楠, 张红, 温娟娟, 张斌

单位：1. 天津师范大学 生命科学学院, 天津 300387;；2. 天津科润蔬菜研究所, 蔬菜种质创新国家重点实验室, 天津市蔬菜遗传育种企业重点实验室, 天津 300381

摘要：快速高效的DNA提取是作物大规模分子育种的关键一步。旨为构建一种快速提取大白菜基因组DNA的方法，以大白菜叶片为试验材料，比较了CTAB法、二步CTAB法以及4种碱裂解法提取DNA的质量，分析了不同方法提取的DNA为模板的PCR扩增效果，还对不同方法提取的基因组DNA的保存时间和保存条件进行了比较，选择最优的方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中进行了应用。结果表明，CTAB法和3种碱裂解法提取的基因组DNA作为模板的PCR扩增产物，都可以通过8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带。其中碱裂解法Ⅲ，不仅提取质量好，而且提取过程简单、快速，能够满足大白菜高通量DNA提取的需要，提取的DNA在4℃和-20℃的条件下保存，将保存至30 d的基因组DNA作为模板进行PCR扩增，产物仍然可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带，说明这种方法保存时间较长，经验证，该方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中的应用效果也较好。碱裂解法Ⅲ显著提高了大白菜分子标记辅助筛选的效率，可广泛应用于大白菜分子标记辅助选择育种。

关键词：大白菜,基因组DNA,快速提取,

基金资助：国家重点研发计划项目（2017YFD0101801）；天津市自然科学基金项目（16JCYBJC29300）；国家重点研发计划项目（2016YFD0101701）；天津市现代农业产业技术体系创新团队建设专项计划（ITTVRS2017003）；国家大宗蔬菜产业技术体系（CARS-25-G-02）；天津市科技计划项目（16PTSYJC00260）