简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测

来源：华北农学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：王英泽, 王巧兰, 曹晴晴, 付育, 刘畅, 王晨晨, 杜朝

单位：河北科技大学 生物科学与工程学院, 河北 石家庄 050018

摘要：为了构建能够灵活用于CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的供体质粒，利用pcDNA3.1（+）-HA-His为模板，分别扩增了其AmpR-ori片段和NeoR片段，然后连接，构建了一个简易型同源重组载体pAmpR-NeoR。载体的正选择标记NeoR基因两侧分别引入了BamH Ⅰ和Xho Ⅰ作为克隆位点，用于左、右同源臂的克隆。利用这一载体，构建了针对小鼠FasL基因的供体质粒。结果显示靶序列发生基因编辑。pAmpR-NeoR以同尾酶作为多克隆位点，这使其具有良好的扩展性、灵活性和序列通用性，便于根据需要进一步改造，以满足具体试验的不同需求。

关键词：基因编辑,同源重组载体,同尾酶,

基金资助：国家自然科学基金面上项目（81171455）；国家自然科学基金青年项目（31100715；81402305）；河北省自然科学基金青年项目（C2013208005）；河北省高等学校科学技术研究项目（QN2014043）；河北科技大学五大平台开放基金课题；中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目（NSKF201605）