玉米弯孢病病原菌ISSR-PCR反应体系的建立及优化

来源：华北农学报杂志2017年第S1期北京时间：

作者：陈丹, 张晓芳

单位：河北省农林科学院 植物保护研究所, 农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室, 河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心, 河北 保定 071000

摘要：为了对玉米弯孢病菌的鉴定、区域发生关系以及遗传多样性等进行研究，采用单因素试验优化玉米弯孢叶斑病菌ISSR-PCR反应体系中模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶、Mg2+的用量，并确定每条引物的最佳退火温度。结果表明，最佳反应体系为：模板DNA 1.6 μL（25 ng/μL）、引物1.4 μL（5 μmol/L）、dNTPs 0.25 μL（2.5 mmol/L）、Taq酶0.4 μL（2.5 U/μL）、Mg2+ 0.8 μL（25 mmol/L）、10×Taq Buffer 2 μL、ddH2O 13.55 μL。在该体系下选用3个玉米弯孢病菌的全基因组DNA，分别对52条ISSR引物进行筛选，筛选出16条多态性高、扩增稳定的ISSR引物。玉米弯孢病菌ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术对该病原菌进行遗传分析奠定了基础。

关键词：玉米弯孢病菌,ISSR-PCR,体系优化,