BVDV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用

来源：华北农学报杂志2017年第S1期北京时间：

作者：马鹏, 李林杰, 常秋燕, 王悦萦, 郭富城, 刘萍, 马晓霞, 马忠仁

单位：1. 西北民族大学, 甘肃省动物细胞工程技术研究中心, 甘肃 兰州 730030;；2. 西北民族大学 生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 730030

摘要：利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列，选取14株BVDV Ⅰ型和7株BVDV Ⅱ型，经序列比对后，设计合成1对特异性引物，建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。通过对RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果显示，该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段，对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性，对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDV Ⅱ型扩增结果为阳性。经对标准毒株的细胞毒进行检测，RT-PCR的灵敏性为10-1 TCID50/mL，SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102 copies/μL。应用2种方法对临床血清样本进行检测，结果比病毒分离方法更为敏感，操作简便。表明建立的RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点，可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV),RT-PCR,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR,应用,

基金资助：企业横向项目（No.XBMu-2015-Bc-11）