慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建

来源：华北农学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：滑留帅, 王璟, 白杰, 朱肖亭, 陈付英, 于翔, 楚秋霞, 辛晓玲, 徐照学, 赵洪昌, 王二耀

单位：河南省农业科学院 畜牧兽医研究所, 河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室, 河南 郑州 450002

摘要：构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系，用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用，首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞，然后利用全基因合成法克隆了绵羊FABP4基因，并构建了过表达FABP4的慢病毒载体。经过包装后，使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞，并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞，最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平。结果表明，经过传代2~3次后，得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞。滴度测定表明，当在96孔板中添加病毒原液量为10-4 μL时，观测不到荧光。当添加量为10-3 μL，能够观测到荧光，说明获得慢病毒的滴度为1×106 TU/mL以上。利用制备的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞，并经过嘌呤霉素筛选后，在荧光显微镜下所有细胞均能观察到绿色荧光。应用Western Blot分析发现，在对照组几乎检测不到FABP4蛋白的表达，而在病毒感染组则能够清晰的观察到FABP4蛋白的表达，说明成功制备了稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系。

关键词：<em>FABP4</em>基因,慢病毒,小尾寒羊,原代成纤维细胞,

基金资助：转基因生物新品种培育子课题（2014ZX08008003-007）；河南省科技攻关计划项目（162102110035）；河南省农业科学院优秀青年科技基金项目（2016YQ18）