菠菜SoGSNOR基因的克隆及原核表达

来源：华北农学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：郭兆来, 白学贵, 李昆志, 徐慧妮

单位：昆明理工大学 生命科学与技术学院, 云南 昆明 650500

摘要：亚硝基谷胱甘肽还原酶（S-nitrosoglutathione reductase，GSNOR）在生物体中调控信号分子一氧化氮（NO）的代谢和平衡。为了深入研究GSNOR的功能，利用RT-PCR和RACE （Rapid-amplification of cDNA ends）技术从菠菜根中克隆了SoGSNOR基因的全长序列，该基因编码框1 140 bp，编码379个氨基酸，GenBank登录号为KR381778。将其克隆到原核表达载体pET32a上，构建原核表达载体pET32a-SoGSNOR，并转化大肠杆菌BL21 star （DE3），通过IPTG诱导重组SoGSNOR在大肠杆菌BL21 star （DE3）中高效表达，表达的融合蛋白分子质量约为65 ku，且在上清液和包涵体中均有表达，可溶性部分经Ni2+ NTA亲和柱纯化，获得纯化蛋白，并注射昆明小鼠，制备多克隆抗体，并对其进行了Western Blot检测，结果表明，稀释10 000倍的抗血清能够检测到与预期SoGSNOR大小一致的目的条带。试验结果为进一步研究菠菜SoGSNOR基因功能奠定了基础。

关键词：S-亚硝基谷胱甘肽还原酶,原核表达,菠菜,

基金资助：国家自然科学基金项目（31101557；31460526）