家蚕抗菌肽基因的克隆及重组蛋白的自诱导表达

来源：华北农学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：谢昆, 王靖, 王丽仙, 朱灵明, 尹建华, 叶青霞, 孙艳

单位：1. 红河学院 生命科学与技术学院, 云南 蒙自 661199;；2. 云南省高校农作物优质高效栽培与 安全控制重点实验室, 云南 蒙自 661199;；3. 云南省昆虫生物医药研发重点实验室, 云南 大理 671003

摘要：抗菌肽是生物体内具有抗菌活性的一种小分子物质，在昆虫细胞抵御外源微生物的感染过程中发挥着重要作用。为研究家蚕抗菌肽基因克隆、重组抗菌肽的表达和纯化方法，以家蚕中肠组织总RNA为模板，设计4对特异性引物，应用RT-PCR技术扩增BmCecropin、BmCecropinB6、BmCecropinD和Bmmoricin这4种抗菌肽基因，通过自诱导方式原核表达4种抗菌肽重组蛋白，并对4种抗菌肽重组蛋白进行Ni-NTA亲和层析和超滤纯化。结果表明，克隆的BmCecropin、BmCecropinB6、BmCecropinD和Bmmoricin这4种抗菌肽的基因大小分别为198，108，105，129 bp，通过自诱导方式表达的BmCecropin、BmCecropinB6、BmCecropinD和Bmmoricin这4种抗菌肽重组蛋白，经SDS-PAGE电泳检测，大小分别为24，21，20，22 ku，经Ni-NTA亲和层析和超滤纯化后的4种抗菌肽重组蛋白条带单一。结果可为4种抗菌肽重组蛋白后续的抑菌试验和在抑菌剂、化妆品和防腐剂等方面的进一步应用奠定基础。

关键词：家蚕,抗菌肽,重组蛋白,自诱导表达,纯化,

基金资助：云南省大学生创新创业训练计划项目（DCXM163018）；红河学院应用型科学研究项目（XJY15Z07）；红河学院博士专项（XJ15B13）；云南省昆虫生物医药研发重点实验室开放课题